DHPLC技术在线粒体DNA法医检测中的应用

变性高效液相色谱技术分析线粒体 DNA的法医学应用

Forensic Utility of Mitochondrial DNA Analysis Based on Denaturing High-Performance Liquid Chromatography

FORENSIC SCIENCES 44(3):281-288,2003

目的： 确定应用 变性高效液相色谱技术（ DHPLC）对人线粒体DNA（ mtDNA）成对样品的比较和混合样品的鉴定的方法在法医学上的应用。

方法： 线粒体 DNA的 D-loop区的高可变区1(HV1)和高可变区2(HV2)序列经PCR扩增后与已知或未知的样品混合， 对 PCR产物进行变性和复性处理以形成同源和异源双链，然后经DHPLC进行温度介导的异源双链分析。

结果： DHPLC技术成功地对144例线粒体DNA的 HV1和HV2 的 PCR产物的 成对样品进行了鉴定。 DHPLC分析完全符合法医测试标准，其分析得到的匹配和不匹配结果与测试者提供的测序结果完全一致。DHPLC还成功鉴定出了测试者提供的一份体液混合样品 。 DHPLC还能成功分离和收集 线粒体 DNA扩增产物混合样品中的各个成分。

结论： DHPLC技术为法医科技工作者提供了一个快速和强有力的筛查线粒体DNA的工具，并且可成为线粒体DNA混合样品鉴定的标准方法。应用此技术的优势可以使以前通过测序技术不能进行分析的案例进行线粒体DNA分析，并且使更多的法医样本由于其线粒体DNA混合样本的鉴定而进入拟准备建立的联合DNA指标系统（CODIS）数据库。

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变性高效液相色谱 的法医学应用：

死亡年龄，身份和性别鉴定

Forensic applications of denaturing high-performance liquid chromatography: determination of age at death, human identification and gender determination

International Congress Series 1239 (2003) S1–S8

摘要：DHPLC在非变性条件下是一种新的自动化的核酸大小分离分析技术，在变性条件下则是突变分析的强有力的工具。我们介绍了应用这种技术在法医学领域三方面的应用。

（1） 确定死亡年龄。线粒体 DNA（mtDNA）随着年龄的增长，积累不同的突变。根据线粒体的突变特性和DHPLC能检测mtDNA突变的性能，我们开发了一种新的方法来确定死亡年龄。从不同年龄的尸体组织中（骼腰肌，肝，肾，核壳，心）分别提取mtDNA，然后对整个mtDNA进行扩增和酶切，使之形成 90–600bp的片段，最后在不同温度下经dHPLC进行分离。我们定性和定量的研究了不同组织随着年龄增长，线粒体 积累的突变的差异。

（2） 身份鉴定。根据 DHPLC在非变性条件下按照核酸大小分离DNA片段的特性，可以用来分离短串联重复序列。我们在5分钟内可对 HUMTH01, F13A01, vWa31和 FES/FPS等不同位点的等位基因进行分离和大小确定。

（3） 性别鉴定。不需对 PCR产物进行任何处理，在非变性条件下，dHPLC在4分钟内对性别特异的等位基因 amelogenin进行分离。