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DNA片段大小分析

变性高效液相色谱技术( DHPLC)是一种简单,快速,非凝胶的核酸分析方法,应用离子对反相液相色谱原理进行DNA变异检测,该技术灵敏度和特异性非常高, 另一个优点是 PCR产物在DHPLC分析前不需要进一步的纯化。

DHPLC 50℃ 条件分析样品,样品峰的洗脱只由碱基对的数量决定洗脱顺序。这种应用在非变性条件下能将染色体插入和缺失片段分开。一般说来,产物分子量的 1% 大小的片段能够被分离。例如, 100bp 的产物能和 101bp 的产物分开, 300bp 的产物能和 303bp 的产物分开。分子量较小的核酸片段含有相应较少的 磷酸盐基团结合柱基质,而分子量较大的片段则含有 较多的磷酸盐基团结合柱基质。因此,当我们将过柱的 乙腈浓度提高,核酸片段就会根据分子量从小到大的顺序被洗脱出来。

WAVE专用 TM 软件能根据 DNA 片段分子量大小标志对系统进行刻度,每个样品的片段大小就可以自动给出。

DHPLC 技术在这种工作模式下,主要用于 PCR 产物质量检测和纯化、微卫星不稳定分析、杂合性缺失分析和基因定量分析等。

 

参考文献

1. 吕炳建 , 来茂德 , 程蕾 等, DHPLC 检测胃癌微卫星不稳定性, 遗传 , 2004 26 5 ): 574-578

2. Elena Kleymenova, Cheryl Lyn Walker Determination of loss of heterozygosity in frozen and paraffin embedded tumors by denaturating high-performance liquid chromatography (DHPLC). J. Biochem. Biophys. Methods 47 (2001) 8390

3. Il-Jin Kim Yong Shin Hio Chung Kang , et al. Robust microsatellite instability (MSI) analysis by denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC). J Hum Genet,2003,48:525 530

4. Joseph M. Devaney, James E. Girard and Michael A. Marino DNA Microsatellite Analysis Using Ion-Pair Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography. Anal. Chem.2000, 72,858-864

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