|
DNA片段大小分析
变性高效液相色谱技术（ DHPLC）是一种简单，快速，非凝胶的核酸分析方法，应用离子对反相液相色谱原理进行DNA变异检测，该技术灵敏度和特异性非常高， 另一个优点是 PCR产物在DHPLC分析前不需要进一步的纯化。
DHPLC 在 50℃
条件分析样品，样品峰的洗脱只由碱基对的数量决定洗脱顺序。这种应用在非变性条件下能将染色体插入和缺失片段分开。一般说来，产物分子量的 1% 大小的片段能够被分离。例如， 100bp 的产物能和 101bp 的产物分开， 300bp 的产物能和 303bp 的产物分开。分子量较小的核酸片段含有相应较少的 磷酸盐基团结合柱基质，而分子量较大的片段则含有 较多的磷酸盐基团结合柱基质。因此，当我们将过柱的
乙腈浓度提高，核酸片段就会根据分子量从小到大的顺序被洗脱出来。
WAVE专用 TM 软件能根据 DNA 片段分子量大小标志对系统进行刻度，每个样品的片段大小就可以自动给出。
DHPLC 技术在这种工作模式下，主要用于 PCR 产物质量检测和纯化、微卫星不稳定分析、杂合性缺失分析和基因定量分析等。
参考文献
1. 吕炳建 ， 来茂德 ， 程蕾 等， DHPLC 检测胃癌微卫星不稳定性， 遗传 ， 2004 ， 26 （ 5 ）：
574-578
2. Elena Kleymenova, Cheryl Lyn Walker ， Determination of loss of heterozygosity in frozen and paraffin
embedded tumors by denaturating high-performance liquid chromatography (DHPLC).
J. Biochem. Biophys. Methods 47 (2001) 83–90
3. Il-Jin Kim Yong Shin Hio Chung Kang ,
et al. Robust microsatellite instability (MSI) analysis by denaturing
high-performance liquid chromatography (DHPLC). J Hum Genet,2003,48:525 – 530
4. Joseph M. Devaney, James E. Girard and Michael A. Marino DNA
Microsatellite Analysis Using Ion-Pair Reversed-Phase High-Performance
Liquid Chromatography. Anal. Chem.2000, 72,858-864
5. Transgenomic 资料
|